硫酸铵沉淀的方法是什么?

对于常规可再生的纯化过程,可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析.

通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效.

沉淀所需溶液：

饱和硫酸铵溶液(在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵,搅拌溶解).

1M Tris-HCl,pH 8.0

用于第一步纯化的缓冲液.

方法：

1,过滤(0.45μm膜)或离心样品(4°C 10000g).

2,每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl,pH 8.0以维持pH值.

3,温和搅拌.逐滴加入硫酸铵溶液,最高至50%饱和度.搅拌1小时.

4,10000g离心20min.

5,去除上清,用等体积相同浓度的硫酸铵溶液(如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液)洗涤重悬沉淀两次.再次离心.

6,使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀.

7,硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去.

硫酸铵沉淀法的基本原理是什么?

这是一种从大量粗制品中提取并部分提纯蛋白质的方法。主要是通过将免疫球蛋白从试样中分离，通常采用的方法是：高浓度的盐离子蛋白溶液和蛋白质的水分子发生竞争，导致其水和蛋白质分子减弱，通过溶解度从溶液沉淀出来。因不同的蛋白质溶解度相同，所以用相同的盐溶液进行沉淀，称为盐析。盐的含量一般用饱和度来表示，而硫酸铵由于具有较高的溶解度，较低的温度系数，容易引起蛋白的变性，因此得到广泛的应用。